Bingoright

提RNA：

1. 10-30mg组织称重+1ml trizol 试剂（平底EP管，方便搅碎，冰上操作）搅成匀浆；
2. 离心：12000g 4℃ 10min；
3. 取上清到新EP管（平），尽可能取上清，室温静置5min；
4. +0.2ml氯仿，vortex 15s， 室温静置2-3min；
5. 离心：12000g 4℃ 15min；
6. 取上清水相到新EP管（尖底），约0.5-0.55ml；
7. +等体积的异丙醇（冰），颠倒混匀，室温沉淀10min；
8. 离心：12000g 4℃ 10min；
9. 弃上清，1ml 75%乙醇，颠倒混匀；
10. 离心：7500g 4℃ 5min；
11. 弃上清，＞5000rpm，1s，吸尽液体；
12. 略干，+20-50ul DERC水。
13. 测RNA浓度：OD260/280在1.8-2.9最佳，＜1.8，可能蛋白质等有机物污染，＞2.0，RNA水解成单核苷酸。
    注意：提RNA最重要的就是快，每个时间段尽量不要延长，不然RNA降解很快。

逆转录：
20ul体系，均在冰上操作。
RNase-free ddH2O to15ul；
5gDNA digester Mix 3ul；
Total RNA 1ug；
孵育：42℃ 2min；
+4Hifair Ⅲ SuperMix plus 5ul；
逆转录程序：25℃ 5min，55℃ 15min，85℃ 5min。